Materiales y Métodos (2023) Olivos al microscopio III: Nutrición y sostén del olivo.

      Como ya hemos indicado uno de nuestros objetivos es poner a disposición del profesorado técnicas que puedan realizarse con materiales caseros. Aunque en las páginas anteriores se muestran algunos detalles hemos creído conveniente crear una página en la que se detallen todos los aspectos necesarios para su realización. A continuación mostraremos imágenes y explicaciones de las mismas junto con un enlace a un documento PDF que recoge, a modo de cuaderno de laboratorio, todas las técnicas y experiencias realizadas. Todos los materiales han sido adquiridos en comercios de la localidad, salvo el formol que lo compramos en Amazon.

Fijación/inclusión en resina de poliéster.

     Para poder cortar, o en nuestro caso reducir el grosor mediante el lijado, es necesario que el material biológico esté embebido en un medio de cierta dureza, como es la parafina o en nuestro caso la resina de poliéster. Para ello son necesarios los siguientes pasos:

1. Cortar las muestras a tamaño muy pequeño (a menor tamaño mejor penetrabilidad de las sustancias empleadas en el proceso).
2. Fijación de la muestra con algún líquido, como el formol, que preserve las estructuras.
3. Sustituir el agua del interior de la muestra por el medio de inclusión. Como el agua y el medio de inclusión no son miscibles es necesario realizar los siguientes pasos:
   1. Deshidratación. En varios pasos sustituiremos el agua por alcohol.
   2. Sustitución del alcohol por otro disolvente que sea miscible con el medio de inclusión, en nuestro caso acetona.
   3. Sustitución de la sustancia puente por el medio de inclusión.
4. Preparación de bloques. Colocación de las muestras en moldes llenos del medio de inclusión.

Ver imágenes.

Obtención de preparaciones.

1. Desmoldar los bloques y fragmentar el bloque para separar las piezas que contenga.
2. Tallado de la pieza de forma que la cara deseada presente la mayor superficie posible.
3. Lijado de esa cara hasta aplanar, pulido y pegado al portaobjetos.
4. Lijado con la ayuda de un taladro vertical hasta un grosor aproximado de 1-2 mm.
5. Acabado de la muestra (lijado y pulido con lijas de agua de granulometría decreciente *).

Ver imágenes.

Otras técnicas.

Cortado con sacapuntas, pegado con pegamento rápido y lijado.

     Los materiales duros, como tallos y raíces, pueden montarse directamente sobre el porta. Para hacerlo debemos cortar una sección fina, lijar y pulir la cara que vayamos a pegar y una vez pegada reducir hasta el grosor deseado mediante lijas de agua. En nuestro caso englobaremos la muestra pegada con pegamento epoxi para reforzar la muestra para el lijado y pulido final.

Ver imágenes.

Fijación/inclusión en resina de poliéster.
Jeringa para los cambios de líquidos.	Imágenes correspondientes al documento Materiales y Métodos de 2019.	Tarrlnas de tallos y hojas
Para facilitar el proceso pueden utilizarse cestillos como los que muestra la imagen, que han sido utilizados en el proyecto personal "Microscopía rudimentaria". Este enlace permite descargarse el documento de materiales y metodos correspondiente a dicho proyecto.
Obtención de preparaciones.
	Imágenes correspondientes al documento Materiales y Métodos de 2019.
Otras técnicas.
Cortado con sacapuntas, pegado con pegamento rápido y lijado, y aclarado de hojas.
La imagen de la derecha corresponde a un fragmento del bloque 24, que contiene hojas de olivo "aclaradas". Pulsando sobre este enlace podrá ver una animación en la que se destaca la hoja transpàrente.

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Aunque no es imprescindible, la utilización de una máquina para el lijado inicial facilita mucho el proceso. Puede utilizarse hasta que el grosor de la muestra es de uno o dos mm.

(*) Tamaño grano lijas de agua.

     Los papeles abrasivos tienen una numeración que corresponde al número de granos existentes por pulgada lineal. La tabla siguiente nos muestra la correspondencia entre dicho número y el tramaño medio de los granos empleados en su fabricación.

     Hemos empleado los papeles de 150-180 para la reducción al grosor deseado, en torno a 0,5 mm para las secciones gruesas y medias y 0.1mm para las secciones finas. Para estas últimas utilizaremos las lijas de 400-500. Una vez conseguido el grosor deseado iremos puliendo con lijados sucesivos hasta llegar al más fino. El espesor final de las muestras finas debe estar en torno a los 0.05 mm. Es relativamente fácil conseguir lijas de 1500-2000 en cualquier ferreteria. Las superiores a 3000 han sido adquiridas en Aliexpress. Si quedan arañazos es posible disimularlos con laca de uñas o aceite.